Медицина. Экспертная система

Иммунологические методы исследования — диагностические методы исследования, основанные на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко используются для лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней, определения групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений, а также в научно-исследовательской работе. Они включают серологические исследования, или серологические реакции, к которым относят обычно реакции прямого воздействия антигенов и антител сыворотки крови in vitro.
Серологические реакции различаются по способности выявлять отдельные классы антител. Реакция агглютинации, например, хорошо выявляет lgM-антитела, но менее чувствительна для определения lgG-антител. Реакции связывания комплемента и гемолиза, которые требуют участия комплемента, не выявляют антитела, не присоединяющие комплемент, например lgA-антитела и lgE-антитела. В реакции нейтрализации вирусов участвуют лишь антитела, направленные против антигенных детерминант поверхности вириона, связанных с патогенностью. Чувствительность И. м. и. {Иммунологические методы исследования} превосходит все другие методы исследования антигенов и антител, в частности радиоиммунный и иммуноферментный анализы позволяют улавливать присутствие белка в количествах, измеряемых в нанограммах и даже в пикограммах. С помощью И. м. и. {Иммунологические методы исследования} определяют группу и проверяют безопасность крови (гепатит В и ВИЧ-инфекция) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 . При трансплантации тканей и органов И. м. и. {Иммунологические методы исследования} позволяют определять совместимость тканей и тестировать методы подавления несовместимости. В судебной медицине используют реакцию Кастеллани для определения видовой специфичности белка и реакцию агглютинации для определения группы крови.
Иммунологические методы широко применяют в лабораторной диагностике инфекционных болезней. Этиологию заболевания устанавливают также на основании прироста антител к возбудителю в сыворотке крови реконвалесцента по сравнению с пробой, взятой в первые дни болезни. На основе И. м. и. {Иммунологические методы исследования} изучают иммунитет населения по отношению к массовым инфекциям, например к гриппу, а также оценивают эффективность профилактических прививок.
Развитию иммунологических методов способствовало создание моноклональных антител, продуцируемых гибридомой, полученной в результате слияния иммунокомпетентной клетки В-лимфоцита и клетки миеломы мышей. Моноклональные антитела несут только одну химически однородную популяцию антител, комплементарную специфической детерминанте антигена, что позволяет осуществлять тонкую дифференциацию белков. Развитие И. м. и. {Иммунологические методы исследования} идет как по линии совершенствования реагентов (чистоты антигенов и антител) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 , так и по линии создания автоматизированных систем постановки реакций и их инструментального учета.
В зависимости от их механизма и учета результатов И. м. и. {Иммунологические методы исследования} можно подразделить на реакции, основанные на феномене агглютинации; реакции, основанные на феномене преципитации; реакции с участием комплемента; реакция нейтрализации; реакции с использованием химических и физических методов.
Реакции, основанные на феномене агглютинации. Агглютинация представляет собой склеивание клеток или отдельных частичек — носителей антигена с помощью иммунной сыворотки к этому антигену.
Реакция агглютинации бактерий с использованием соответствующей антибактериальной сыворотки относится к наиболее простым серологическим реакциям. Взвесь бактерий добавляют к различным разведениям испытуемой сыворотки крови и через определенное время контакта при t°37° регистрируют, при каком наивысшем разведении сыворотки крови происходит агглютинация. Реакцию агглютинации бактерий используют для диагностики многих инфекционных болезней: бруцеллеза, туляремии, брюшного тифа и паратифов, бациллярной дизентерии, сыпного тифа.
Реакции агглютинации для определения группы крови и резус-фактора основаны на взаимодействии аллоантител (изоантител) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 и антигенов эритроцитов (связанные ссылки: Группы крови) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 . Антитела против резус-фактора являются неполными, они не способны к прямой реакции с резус-положительными эритроцитами, поэтому для их обнаружения используют реакцию Кумбса, основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток. К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, а вслед за этим антиглобулиновую сыворотку против lgG (непрямая реакция Кумбса) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 . Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против lgG, и происходит агглютинация эритроцитов.
Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинации (РПГА, РНГА) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 . В ней используют эритроциты или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 , на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 или антитела. Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами. называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов.
Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 , простейшими (малярия) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 , а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 основана на феномене предотвращения (торможении) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 иммунной сыворотки гемагглютинации эритроцитов вирусами, используется для выявления и титрования противовирусных антител. Она служит основным методом серодиагностики гриппа, кори, краснухи, эпидемического паротита, клещевого энцефалита и других вирусных инфекций, возбудители которых обладают гемагглютинирующими свойствами. например, для серодиагностики клещевого энцефалита в лунки панели разливают двукратные разведения сыворотки больного на щелочном боратном буферном растворе. Затем добавляют определенное количество, обычно 8 АЕ (агглютинирующих единиц) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 , антигена клещевого энцефалита и после 18 ч экспозиции при t°4° вносят взвесь гусиных эритроцитов, приготовленную на кислом фосфатно-буферном растворе. Если в сыворотке крови больного есть антитела к вирусу клещевого энцефалита, то антиген нейтрализуется и агглютинация эритроцитов не происходит.
Реакции, основанные на феномене преципитации. Преципитация происходит в результате взаимодействия антител с растворимыми антигенами. Простейшим примером реакции преципитации является образование в пробирке непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело. Широко применяют различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлетрофорез) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 , которые носят одновременно качественный и количественный характер. В результате свободной диффузии в геле антигенов и антител в зоне оптимального их соотношения образуются специфические комплексы — полосы преципитации, которые выявляют визуально или при окрашивании. Особенностью метода является то, что каждая пара антиген — антитело формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител.
Для постановки двойной иммунодиффузии наливают слой растопленного геля на стеклянную пластинку и после затвердевания вырезают лунки диаметром 1,5—3 мм. В расположенные по кругу лунки помещают исследуемые антигены, а и центральную лунку — иммунную сыворотку известной специфичности. Диффундируя навстречу друг другу, гомологичные сыворотки и антигены образуют преципитат.
При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр которых пропорционален концентрации антигена. Метод используют для определения классов иммуноглобулинов, а модификации метода можно применять для определения противомикробных антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов.
Иммуноэлектрофорез основан на усилении миграции в геле антигенов и антител путем помещения пластины геля с реагентами в электрическое поле. При этом достигается разделение антигенов и антител на компоненты в соответствии с их подвижностью и зарядом.
Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против lgG-антител, которая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген — антитело обнаруживают методом авторадиографии.
Реакции с участием комплемента, в качестве которого используют свежую сыворотку крови морской свинки, основаны на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам.
Реакция связывания комплемента (РСК) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген — антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами барана (индикаторная система) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 . При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов гемолиза не наблюдается. Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 , вирусных и бактериальных инфекций.
Реакция радиального гемолиза эритроцитов может протекать в геле. Взвесь эритроцитов барана помещают в агарозный гель с комплементом; в застывшем на стекле слое делают лунки и вносят в них гемолитическую сыворотку. Вокруг лунок в результате радиальной диффузии антител образуется зона гемолиза, радиус которой прямо пропорционален титру сыворотки. Если сорбировать на эритроцитах какой-либо антиген, например гликопротеиновый гемагглютинин вируса гриппа, краснухи или клещевого энцефалита, то можно воспроизвести феномен гемолиза иммунными сыворотками к этим вирусам. Реакцию радиального гемолиза в геле применяют в диагностике вирусных инфекций. Она характеризуется простотой постановки, нечувствительностью к сывороточным ингибиторам, позволяет титровать сыворотки крови по диаметру зоны гемолиза, не прибегая к серийным разведениям.
Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (СЗ) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 . Если к антигену (бактериям, вирусам и др.) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген — антитело, покрытый СЗ-компонентом комплемента. Эту реакцию применяют при изучении ряда вирусных инфекций (клещевого энцефалита, денге) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 , которые сопровождаются иммунопатологическими процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.
Реакция нейтрализации основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.
Реакции с использованием химических и физических меток. Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченных флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченное флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген — антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате в цитоплазме нервных клеток выявляются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.
Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции. основанный на выявлении комплекса антиген — антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t° 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.
Иммунофлюоресценцию широко используют не только в бактериологии, вирусологии, паразитологии, но и в иммунопатологии для обнаружения антител к тканевым антигенам человека.
Иммуноферментные, или энзим-иммунологические, методы основаны на использовании антител, конъюгированных с ферментами, главным образом пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Чтобы обнаружить соединение меченых антител с антигеном, добавляют субстрат, разлагаемый присоединенным к lgG ферментом, с окрашиванием в желто-коричневый (пероксидаза) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 или желто-зеленый (фосфатаза) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 цвет. Используют также ферменты, разлагающие не только хромогенный, но и люмогенный субстрат. В этом случае при положительной реакции появляется свечение. Подобно иммунофлюоресценции иммуноферментный метод применяют для обнаружения антигенов в клетках или титрования антител на антигенсодержащих клетках.
Наиболее популярной разновидностью иммуноферментного метода является иммуносорбция. На твердом носителе, которым могут быть целлюлоза, полиакриламид, декстран и различные пластмассы, сорбируют антиген. Чаще носителем служит поверхность лунок микропанелей. В лунки с сорбированным антигеном вносят исследуемую сыворотку крови, затем меченную ферментом антисыворотку и субстрат. Положительные результаты учитывают по изменению цвета жидкой среды. Для обнаружения антигенов на носитель сорбируют антитела, затем вносят в лунки исследуемый материал и проявляют реакцию меченной ферментом антимикробной сывороткой. Повышению чувствительности иммунофлюоресцентного и иммуноферментного методов способствует введение в систему реакции авидина и биотина.
Радиоиммунологический метод основан на применении радиоизотопной метки антигенов или антител. Является наиболее чувствительным методом определения антигенов и антител, используется для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов. Первоначально он был разработан как специфический метод измерения уровня циркулирующих в крови гормонов. Тест-системой являлись меченный радионуклидом гормон (антиген) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 и антисыворотка к нему. Если к такой антисыворотке добавить материал, содержащий искомый гормон, то он свяжет часть антител, при последующем внесении меченого титрованного гормона с антителами свяжется уменьшенное по сравнению с контролем его количество. Результат оценивают по сопоставлению кривых связанной и несвязанной радиоактивной метки. Эта разновидность метода носит название конкурентной реакции. Существуют и другие модификации радиоиммунологического метода.
Иммуногистологические методы предназначены для определения антигенов на поверхности или внутри клетки, например для обнаружения маркеров лимфоцитов и иммунокомплексов при гломерулонефритах и других заболеваниях почек. В этой реакции для выявления антигенов пользуются или иммунофлюоресценцией, или иммуноферментными конъюгатами с пероксидазой. Количество специфических антигенов определяют по интенсивности окрашивания. Иногда используют автоматическую регистрацию с помощью спектрофотометра.
Иммуноблоттинг применяют для выявления антител к отдельным антигенам или «узнавания» антигенов по известным сывороткам. Метод состоит из 3 этапов: разделения биологических макромолекул (например, вируса) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 на отдельные белки с помощью электрофореза в полиакриламидном геле; переноса разделенных белков из геля на твердую подложку (блот) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 путем наложения пластины полиакриламидного геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозу (электроблоттанг) ( 1542971608 ELTASK.COM: 881951998 Медицина.Здоровье.Медицинский справочник.Справочник болезней.Справочник по медицине. 1779120005 Справочник. Отзывы. android ) 1542971608 ; выявления на подложке искомых белков с помощью прямой или непрямой иммуноферментной реакции. Как диагностический метод иммуноблоттинг используют при ВИЧ-инфекции. Диагностическую ценность имеет обнаружение антител к одному из белков внешней оболочки вируса.

Источники: Иммунологаческая диагностика вирусных инфекций, под редакцией Т.В. Перадзе и П. Халонена, М., 1985; Иммунолюминесценция в медицине, под редакцией Е.Н. Левиной, М., 1977; Иммуноферментный анализ, под редакцией Т.Т. Нго и Г. Ленхоффа, пер. с англ., М., 1988; Практическая иммунология, под редакцией П.Н. Бургасова и И.С. Безденежных, М., 1969.

Страница ПОМОЩИ. Просим Вас сообщать о замеченных Вами ошибках и оставлять Ваши отзывы (в меню android-программы для этого предназначена опция "Cообщение"). Также, перейдя по следующей ссылке, Вы можете задать вопрос или отправить Сообщение разработчику